Rumah > Berita > Konten

Apa Desain Laboratorium PCR

Aug 03, 2020

Inti dari desain laboratorium PCR:


1, tata letak laboratorium PCR

Laboratorium uji amplifikasi PCR dibagi menjadi tiga area kerja terpisah pada prinsipnya: area penyimpanan dan persiapan reagen, area persiapan spesimen, area analisis produk amplifikasi dan amplifikasi. Untuk menghindari kontaminasi silang, memasuki setiap area kerja harus mengikuti satu arah secara ketat, yaitu hanya dari penyimpanan reagen dan area persiapan → area persiapan spesimen → area analisis produk amplifikasi dan amplifikasi. Transfer reagen dan sampel antara setiap area eksperimen harus dilakukan melalui jendela transfer.



2. Desain sistem AC dan ventilasi laboratorium serta kontrol tekanan

Laboratorium PCR tidak memiliki persyaratan tingkat pemurnian yang ketat, tetapi untuk menghindari kemungkinan kontaminasi silang antara berbagai area percobaan, disarankan untuk menggunakan formulir organisasi pengiriman penuh dan udara buangan penuh. Pada saat yang sama, rasio pasokan udara dan pembuangan harus dikontrol secara ketat untuk memastikan persyaratan tekanan di setiap area percobaan.


微信图片_20200701162204

(1) Area penyimpanan dan persiapan reagen

Operasi utama di area percobaan ini adalah persiapan reagen penyimpanan, pengeluaran reagen dan persiapan campuran reaksi utama. Reagen dan bahan yang digunakan untuk persiapan sampel harus diangkut langsung ke area ini dan tidak melalui area lain. Bahan baku reagen harus disimpan di zona ini dan disiapkan ke dalam reagen penyimpanan yang diperlukan di zona ini. Untuk mengontrol tekanan aliran udara, area ini harus mempertahankan sedikit tekanan positif di luar.



(2) Area persiapan spesimen

Operasi utama di bidang ini adalah pengawetan sampel, ekstraksi asam nukleat (RNA, DNA), penyimpanan dan penambahan ke tabung reaksi amplifikasi dan mengukur sintesis DNA. Gradien tekanan di area ini harus berupa tekanan positif relatif terhadap area yang berdekatan untuk menghindari polusi aerosol yang masuk ke area dari area yang berdekatan. Selain itu, karena kontaminasi yang disebabkan oleh aerosol dapat terjadi selama operasi pemuatan sampel, jalan kaki yang tidak perlu di area ini harus dihindari.


(3) Area analisis produk amplifikasi dan amplifikasi

Operasi utama di bidang ini adalah amplifikasi DNA dan penentuan fragmen yang diperkuat. Selain itu, penambahan template DNA yang telah disiapkan (dari area preparasi sampel) dan preparasi campuran reaksi utama (dari area penyimpanan dan preparasi reagen) ke dalam campuran reaksi juga dapat dilakukan di area ini. Persyaratan gradien tekanan di area ini adalah: tekanan negatif relatif terhadap area yang berdekatan untuk menghindari kebocoran aerosol dari area ini. Untuk menghindari polusi yang disebabkan oleh aerosol, aktivitas berjalan yang tidak perlu di area tersebut harus diminimalkan. Operasi individual seperti penambahan sampel harus dilakukan di bangku yang sangat bersih.


3. Pencegahan dan pengendalian polusi


Masalah inti dari desain laboratorium PCR adalah bagaimana menghindari kontaminasi. Dalam pekerjaan aktual, jenis pencemaran berikut umum terjadi: kontaminasi produk yang diperkuat; kontaminasi DNA genom alami; kontaminasi reagen dan kontaminasi antar spesimen. Karena sekali pencemaran terjadi maka percobaan harus dihentikan sampai sumber pencemaran ditemukan, dan hasil percobaan harus batal dan percobaan harus diulang. Oleh karena itu, mencari sumber pencemaran di sekitar laboratorium setelah pencemaran terjadi memakan waktu lama dan membosankan, serta membuang tenaga dan sumber daya material. Oleh karena itu, untuk menghindari pencemaran, prioritas pertama adalah pencegahan, bukan pemberantasan.


(1) Pembagian wilayah kerja yang ketat

Pengaturan dari setiap area percobaan masuk akal; setiap area percobaan harus memiliki tanda yang jelas (seperti nomor rumah yang menarik perhatian atau warna dasar yang berbeda, dll.) untuk menghindari kebingungan peralatan dan reagen di area percobaan yang berbeda.


(2) Pengaturan sistem yang wajar

Pengaturan sistem AC dan ventilasi yang wajar, coba gunakan sistem pengantaran penuh dan sistem pengondisian udara buangan penuh; kontrol tekanan aliran udara yang ketat untuk memastikan persyaratan tekanan yang berbeda di area eksperimen yang berbeda.


(3) Operasi standar

Teknisi dari laboratorium pengujian amplifikasi harus menjalani pelatihan di tempat kerja, dan hanya setelah memenuhi kualifikasi mereka dapat terlibat dalam pengujian amplifikasi gen klinis; selama operasi eksperimental, operator harus memakai sarung tangan dan sering menggantinya. Selain itu, penggunaan tutup sekali pakai dalam operasi juga merupakan langkah efektif untuk mencegah pencemaran; pekerjaan pembersihan tepat waktu dan benar. Setelah pekerjaan percobaan selesai, area tersebut harus segera dibersihkan. Selain cairan desinfeksi konvensional untuk menyeka dan mendisinfeksi permukaan atau desinfeksi iradiasi sinar ultraviolet, beberapa peralatan eksperimen juga harus diautoklaf.


(4) Manajemen yang ketat

Kontrol ketat personel yang masuk dan keluar laboratorium. Personel yang tidak ada hubungannya dengan percobaan tidak diizinkan masuk dan keluar dari laboratorium sesuka hati. Jika memungkinkan, siapkan lorong dan pintu independen untuk masuk dan keluar dari seluruh area percobaan; meminimalkan berjalan kaki yang tidak perlu di area percobaan untuk mengurangi kemungkinan kontaminasi silang; produk amplifikasi Area analisis adalah sumber utama kontaminasi produk yang diperkuat. Cairan limbah tidak dapat dibuang di laboratorium. Ini harus direndam dan didesinfeksi dengan disinfektan dan dibuang dari laboratorium. Bahan sekali pakai seperti ujung bekas juga harus didesinfeksi. Setelah perendaman dan desinfeksi, perlakuan seragam, seperti insinerasi, dll; Area analisis produk amplifikasi mungkin menggunakan beberapa mutasi genetik dan zat beracun, dan perhatian khusus harus diberikan pada perlindungan keselamatan personel eksperimen.


(5) Fasilitas penunjang laboratorium lengkap

Fasilitas pendukung laboratorium yang lengkap diperlukan untuk memastikan pekerjaan eksperimen. Peralatan dan instrumen yang sesuai harus dilengkapi sesuai dengan konten eksperimental yang berbeda di setiap laboratorium, seperti bangku ultra-bersih, sentrifugal, sampler, dll.